• 1、產品回收率計算公式
• 2、蛋白質中的含氮量是如何測定的一般認為蛋白質中的平均含氮量為16%,于是含氮量=蛋白質量*16%,蛋白質量=含氮量/16%=含氮量*6.25 氨基酸脫水縮合后剩余物的相對分子質量是其含氮量的6.25倍(約

1、產品回收率計算公式

?產品回收率計算公式：

2、蛋白質中的含氮量是如何測定的一般認為蛋白質中的平均含氮量為16%,于是含氮量=蛋白質量*16%,蛋白質量=含氮量/16%=含氮量*6.25 氨基酸脫水縮合后剩余物的相對分子質量是其含氮量的6.25倍(約

這是最經典的方法了——微量凱氏法
一、原理
植物組織中的有機氮化物包括蛋白氮和非蛋白氮.非蛋白氮主要是氨基酸和酰胺,以及少量無機氮化物,是可溶于三氯乙酸溶液的小分子.可加入三氯乙酸,使其最終濃度為5％,將蛋白質沉淀出來,分別測定總氮、蛋白氮或非蛋白氮；通常只測定總氮或蛋白氮.將植物材料與濃硫酸共熱,硫酸分解為二氧化硫、水和原子態氧,并將有機物氧化分解成二氧化碳和水；而其中的氮轉變成氨,并進一步生成硫酸銨.為了加速有機物質的分解,在消化時通常加入多種催化劑,如硫酸銅、硫酸鉀和硒粉等.消化完成后,加入過量NaOH,將NH4+轉變成NH3,通過蒸餾把NH3導入過量的硼酸溶液中,再用標準鹽酸滴定,直到硼酸溶液恢復原來的氫離子濃度.滴定消耗的標準鹽酸摩爾數即為NH3的摩爾數,通過計算,可得出含氮量.
蛋白質是一類復雜的含氮化合物,每種蛋白質都有其恒定的含氮量,（約在14％～18％,平均約含氮16％）所以,可用蛋白氮的量乘以6.25（100／16＝6.25）,算出蛋白質的含量.若以總氮含量乘以6.25,就是樣品的粗蛋白含量.試樣中若含有硝態氮時,首先要使硝態氮還原為銨態氮,可加入水楊酸和硫代硫酸鈉,使硝態氮與水楊酸在室溫下作用生成硝基水楊酸,再用硫代硫酸鈉粉使硝基水楊酸轉化為銨鹽.由于水楊酸與硫代硫酸鈉會消耗一部分硫酸,所以消化時的硫酸用量要酌情增加.
二、材料、儀器設備及試劑
（一）材料：各種干燥、過篩（60～80目）的植物樣品
（二）儀器設備：1.消化管；2.微量凱氏定氮蒸餾裝置一套（圖17）；3.三角燒瓶；4.微量滴定管；5.量筒；6.容量瓶；7.燒杯；8.移液管等.
三、實驗步驟
（一）樣品提取分離：準確稱取烘至恒重的樣品0.1000g～0.5000g（依樣品含氮量而定,含氮1～3mg宜）,置10ml離心管中,加入5ml5％三氯乙酸,90℃水浴中浸提15min,不時攪拌,取出后用少量蒸餾水沖洗玻棒,待溶液冷卻后,4000rpm離心15min,上清液棄去.并用5％三氯乙酸洗沉淀2～3次,離心,棄去上清液,最后用蒸餾水將沉淀無損地洗入鋪有濾紙的漏斗上,去掉濾液后,將沉淀和濾紙在50℃下烘干,用于蛋白氮的測定.
（二）樣品的消化：取4支消化管編號.1號管直接放入稱好的材料用于測定總氮,2號管放入上述烘干的濾紙和沉淀,用于蛋白氮的測定,3號管放入同樣濾紙一張、4號管不加任何樣品作為空白對照,注意將樣品放入消化管底部.向各消化管加濃硫酸5ml,混合催化劑0.3g～0.5g,將樣品浸泡數h或放置過夜后,在管口蓋一小漏斗,放在遠紅外消煮爐上加熱消化.開始時溫度可稍低,以防止內容物上升至管口.泡沫多時,可從小漏斗加入2～3滴無水乙醇.到管口出現白色霧狀物時,泡沫已不再產生；此時可逐漸升溫,使內容物達到微沸.直到消化液變為清澈透明為止.消化過程中,若在消化管上部發現有黑色顆粒時,應小心地轉動消化管,用消化液將它沖洗下來,以保證樣品消化完全.消化過程約需2～3h.
（三）定容消化完畢待溶液冷卻后,沿管壁仔細加入10ml左右無氨蒸餾水,以沖洗管壁,再將消化液小心轉入100ml容量瓶中.以無氨水少量多次沖洗消化管,洗滌液并入容量瓶.冷卻后用無氨水定容至刻度,混勻備用.
（四）蒸餾及滴定 以下幾步進行：
1.儀器的洗滌：先經一般洗滌后,還要用水蒸氣洗滌.可按下列方法進行蒸氣洗滌.先在蒸氣發生器中加入2／3體積的蒸餾水（事先加入幾滴濃硫酸,使其酸化,加入甲基紅指示劑,并加入少許沸石或毛細玻璃管以防止爆沸）.打開漏斗下的夾子,用電爐或酒精爐加熱至沸騰,使水蒸氣通入儀器的各個部分,以達到清洗的目的.在冷凝管下端放置一個三角瓶接收冷凝水.然后關緊漏斗下的夾子,繼續用蒸氣洗滌5min.沖洗完畢,夾緊蒸氣發生器與收集器之間的連接橡膠管,蒸餾瓶中的廢液由于減壓而倒吸進入收集器,打開收集器下端的活塞排除廢液.如此清洗2～3次,再在冷凝管下端換放一個盛有硼酸－指示劑混合液的三角瓶,使冷凝管下口完全浸沒在液面以下0.5cm處,蒸餾1～2min,觀察三瓶內的溶液是否變色.如不變色,表示蒸餾裝置內部已洗干凈.移去三角瓶,再蒸餾1～2min,用蒸餾水沖洗冷凝管下口,關閉電爐,儀器即可供測定樣品使用.
2.標準硫酸銨測定為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術,并檢驗實驗的準確性,找出系統誤差,常用已知濃度的標準硫酸銨測試三次.在三角瓶中加入20ml硼酸－指示劑混合液,將此三角瓶承接在冷凝管下端,并使冷凝管的出口浸入溶液中.注意在加樣前務必打開收集器活塞,以免三角瓶內液體倒吸.準確吸取2ml硫酸銨標準溶液,加到漏斗中.
四、結果計算
樣品中總氮量（％）＝0.010×（V3—V0）×100×14/（W×1000×10）×100×氮的回收率
樣品中蛋白氮含量（％）＝0.0100×（V1－V2－V0）×100×14/（W×5×1000）×100×氮的回收率
回收率（％）＝0.0100×（V－V0）×14/（2.0×0.6×100）×100

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